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              影響ELISA法手工測定的因素


                 酶聯免疫吸附實驗(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。ELISA法具有靈敏度高、特異性強、重復性好的特點,并具有操作簡便、無放射性危害的優點,影響結果的因素有如下方面。
              1 試劑盒

              (1)抗原、抗體活性對效價的影響:主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活,結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高,對雜質的反應靈敏度也高,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性。

              (2)酶結合物濃度過高,也會導致OD值假性增高。

              2 試驗儀器

              (1)加樣器是否經過校正,酶免測定血清用血量很少,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不精確,會使結果忽高忽低。

              (2)每次洗板前,應檢查洗板機針孔有無堵塞。

              3 操作

              (1)檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用,試劑用完及時放回冰箱冷藏,以免造成試驗結果假性降低。

              (2)加樣時注意勿觸及包被板底部,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性。

              (3)洗滌不充分,會使結果假性增高,過分洗滌呈假陰性。

              (4)比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時,底部留有水汽,應將板底擦干后進行比色,水汽或孔內氣泡也會使OD值升高。

              (5)抗原與抗體反應達到完全平衡,依賴于溫度與時間。溫度高于45℃易引起失活及標記物脫落,溫度低于4℃,影響反應速度??傊?,由于ELISA實驗的影響因素較多,在實際工作中必須操作規范、仔細,避免和排除各種因素的影響,使之得到準確可靠的檢驗結果。

               

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