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    克倫特羅快速檢測試劑盒

    克倫特羅快速檢測試劑盒

    • 商品貨號:ECS031887
      商品庫存: 1
    • 上架時間:2019-01-14
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    商品描述:

    商品屬性

    克倫特羅快速檢測試劑盒使用說明書

    目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中免疫球蛋白的含量。

     

    實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本克倫特羅快速檢測試劑盒水平。用純化的克倫特羅快速檢測試劑盒捕獲抗體包被微孔板,制成固相體,往包被的微孔中依次加入克倫特羅快速檢測試劑盒,再與HRP標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌中的克倫特羅快速檢測試劑盒呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品計算樣品克倫特羅快速檢測試劑盒含量。

     

    試劑盒組成

    試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
    說明書 1份 1份  
    封板膜 2片 2片  
    密封袋 1個 1個  
    酶標包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
    標準品 0.3ml×6管 0.3ml×6管 2-8℃保存
    酶標試劑 5 ml×1瓶 10 ml×1瓶 2-8℃保存
    樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
    顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
    顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
    終止液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
    20×濃縮洗滌液 15ml×1瓶 25ml×1瓶 2-8℃保存
    注:標準品濃度依次為:120、60、30、15、7.5、0 pg/mL.
    樣本處理及要求:
    1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
    2. 血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
    3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
    4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
    5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
    6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
    7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟:
    標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。
    加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
    配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 
    注意事項:
    試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
    請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    底物請避光保存。
    嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
    所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    本試劑不同批號組分不得混用。10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
     計算:
    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,    
    在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD      
    值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      
    倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      
    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值      
    代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      
    倍數,即為樣品的實際濃度。

    試劑盒性能:
    1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。
    2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。
    保存條件及有效期:
    1.試劑盒保存: 2-8℃。
    2.有效期: 6個月
     

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